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X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl β-D-Galactopyranoside)

产品货号 产品规格 目录价 库存 数量
C20204 100 mg ¥53.00 100
C20204 1 g ¥235.00 100
C20204 5 g ¥972.00 100
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效能等同于Biotium X-Gal

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实验操作小课堂

  • 问:X-Gal和IPTG分别起什么作用?
  • 答:X-Gal:β-半乳糖苷酶的特异性显色底物,被活性酶水解后生成稳定的深蓝色不溶性靛蓝产物,是显色信号的来源。
    IPTG:lac操纵子的诱导剂,用于解除lac阻遏蛋白的抑制,启动lacZ基因转录,确保β-半乳糖苷酶足量表达;无IPTG时即使质粒完整也无法正常显色。
  • 问:平板法和涂布法选择哪一个?
  • 答:倒平板法:培养基冷却至50 ℃左右加入X-Gal和IPTG,混匀后倒板;适合批量制备,显色均匀,适合大规模筛选。
    涂布法:在预制空白平板表面涂布X-Gal和IPTG储备液,吸收后使用;适合小批量快速实验,无需等待培养基降温。
    两种方法筛选效果无本质差异,可根据实验规模选择。

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X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl β-D-Galactopyranoside)
X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷)

稳定显色底物,结果辨识度高,兼容蓝白斑筛选与报告基因检测

  • 储运条件 -20 ℃避光保存,冰袋运输
  • 产品简介 X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷)显色试剂盒是用于β-半乳糖苷酶原位检测的显色产品,核心组分为X-Gal。X-Gal作为β-半乳糖苷酶特异性生色底物,可被酶水解后经氧化偶联生成稳定不溶蓝色沉淀,原位标记酶活性信号。试剂盒采用预混体系,省去繁琐试剂配制,底物纯度高、显色稳定、背景低、信号不易扩散,普通光学显微镜即可观察,不存在荧光淬灭困扰。依托经典LacZ报告基因体系,本产品可用于菌株蓝白斑筛选、LacZ基因表达示踪、细胞及组织SA-β-gal衰老染色,适用于细胞生物学、基因功能、衰老机制、化合物筛选等研究,为阳性克隆鉴定、衰老细胞识别、基因表达定位提供稳定可靠的定性、半定量结果,助力发育、衰老相关机制研究与转化探索。
  • 应用范围 原核分子克隆筛选、细胞衰老鉴定、lacZ报告基因检测
  • 产品特点

    显色性能优异:作为β-半乳糖苷酶经典生色底物,水解后生成稳定的深蓝色不溶性沉淀,本底干扰低,菌落/细胞显色边界清晰,结果直观易判读;

    纯度高、稳定性好:采用高纯度结晶级原料,批次均一性强;粉末避光储存稳定性优异,配制的储备液冻存可长期保持活性,实验重复性佳;

    兼容性广、通用性强:适配原核、真核多类实验体系,配合IPTG等常规试剂即可使用,符合通用实验室操作流程;

    应用场景丰富:覆盖分子克隆、细胞衰老、报告基因检测、神经示踪、生物材料评估等多研究领域,是生命科学基础研究的通用核心试剂。

  • 产品参数

    CAS号:7240-90-6;

    分子量:408.6

    分子式:C14H15BrClNO6

    溶解性:Soluble in DMSO or DMF

  • 产品组分

    组分

    规格

    A. X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl β-D-Galactopyranoside)

    100 mg

    1 g

    5 g

  • 结果判读

    定性分析(显微镜):

    图1. 在正向激活型蓝白斑体系筛选重组阳性克隆

    白色/乳白色菌落:菌落呈现培养基本身的乳白色、不发蓝,说明外源DNA片段未成功插入质粒的多克隆位点,无法完成α-互补,无β-半乳糖苷酶活性,X-Gal未被水解显色。

    深蓝色菌落:mKO基因以正确方向插入载体克隆位点,恢复了下游lacZα基因的完整开放阅读框,表达出功能性α肽;与宿主DH5α的缺陷蛋白完成α-互补,生成有催化活性的β-半乳糖苷酶,水解培养基中的X-Gal生成不溶性深蓝色靛蓝产物,菌落显色。

    注:图片引自参考文献《An Alternative Method to Facilitate cDNA Cloning for Expression Studies in Mammalian Cells by Introducing Positive Blue White Selection in Vaccinia Topoisomerase I-Mediated Recombination》 (doi: 10.1371/journal.pone.0139349) 

    注:本体系为正向激活型蓝白斑体系,常规的插入失活型蓝白斑的载体设计逻辑完全相反。

  • 问:X-Gal和IPTG分别起什么作用?
  • 答:X-Gal:β-半乳糖苷酶的特异性显色底物,被活性酶水解后生成稳定的深蓝色不溶性靛蓝产物,是显色信号的来源。
    IPTG:lac操纵子的诱导剂,用于解除lac阻遏蛋白的抑制,启动lacZ基因转录,确保β-半乳糖苷酶足量表达;无IPTG时即使质粒完整也无法正常显色。
  • 问:平板法和涂布法选择哪一个?
  • 答:倒平板法:培养基冷却至50 ℃左右加入X-Gal和IPTG,混匀后倒板;适合批量制备,显色均匀,适合大规模筛选。
    涂布法:在预制空白平板表面涂布X-Gal和IPTG储备液,吸收后使用;适合小批量快速实验,无需等待培养基降温。
    两种方法筛选效果无本质差异,可根据实验规模选择。
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    质量   浓度   体积   分子量 *
    = × ×
    质量   浓度
    = ×
    体积   分子量 *
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    浓度 (start) × 体积 (start) = 浓度 (final) × 体积 (final)
    × = ×
    浓度 (start) × 体积 (start) =
    × =
    浓度 (final) × 体积 (final)
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    分子量:g/mol
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